استخراج ترکیبات بیو پزشکی از ارگانیسم های دریایی
اقیانوسها و آبها که مادر حیات و زندگی هستند ، منبعی منحصر به فرد برای تولیدات طبیعی محسوب می شوند که اين توليدات به طور عمده در ارگانیسم های زنده تجمع می یابند . این ترکیبات خواص دارویی فعال ومتفاوتی را از خود نشان می دهند بطوري كه کشف ترکیبات فعال بیولوژیکی عمدتاً جهت درمان بیماری های کشنده مانند سرطان وسندروم کاهش ایمنی بدن ) AIDS ( و آرتریت و... بكار مي روند .
این دارو ها را عمدتاً از میکروارگانیسم های آبی استخراج نموده اند . جلبک ها و بی مهرگان نیز منبع مهمی برای این دارو ها محسوب می شوند ، ولی این دارو ها به مقدار اندکی در مهره داران یافت شده است .
امروزه بكارگيري تکنولوژی های پیشرفته شیمی ، محققین را جهت استخراج ترکیبات فعال بیولوژیک دریا ها و اقیانوس ها یاری می نماید .
بیوتکنولوژی دریایی علمی است که در آن از ارگانیسم های دریایی جهت تولید ترکیبات ارزشمند استفاده می شود .
با استفاده از روش های بیوتکنولوژی ، بشر قادر است کاربرد تعدادی از این روش های بیولوژیک جهت استخراج تركيبات مفيد را توضیح داده و اثبات كند .
به طوری که فقط 10% از کل 25000 گونۀ گیاهی ( دریایی و خشکی ) برای این فعالیت های زیستی بررسی شده اند .
محیط زیست دریا بیش از 80% از گونه های مختلف گیاهی و جانوری را شامل می شود . در سال های اخیر تعدادی از ترکیبات فعال زیستی از گونه های مختلف جانوری مانند تونی کیت ها ، اسفنج ها ، مرجان های نرم ، خزه ها ، نرمتنان دریایی و سایر ارگانیسم های دریایی استخراج شده است ) Jha&Rong , 2004 ( .
جستجوی متابولیت های جدید از ارگانیسم های دریایی چیزی حدود 10000 متابولیت به میزان کمتر یا بیشتر است که جداسازی شده است ) Singh et al ., 2004 ( .
به دست آوردن تولیدات طبیعی دریایی
تولیدات طبیعی استفادۀ زیادی در غذا ، رنگدانه ها ، انواع رایحه (عطر) ، حشره کش ها ، در پزشکی و... دارد . بواسطة در دسترس بودن راحت گیاهان خشکی ، اين گياهان هميشه کاربرد زیادی نیز دارند . به طوری که می توانند منبع مهمی در تولیدات بسیار سودمند پزشکی به خصوص برای طب سنتی یا پزشکی بشر باشند . 25% از کل فروش دارویی ، داروهایی هستند که از تولیدات طبیعی گیاهان به دست می آیند و بعلاوه 12% هم پایه ای برای تولیدات میکروبی به عنوان تولیدات طبیعی محسوب می شوند .
محیط زیست دریا دارای یک رنج حرارتی طبیعی ( از کمتر از دمای یخ زدگی در آبهای Antarctic تا حدود C ˚ 350 در شکاف عمیق هیدروترمال ) می باشد ، همچنين دارای یک رنج فشار ( At 1000-1 ) و یک رنج نوترینتی ( در آبهای الیگو تروف تا یوتروف ) می باشد همچنين در همة این آبها یک منطقۀ نوری و غیر نوری مشاهده می شود Jha&Rong ., 2004 ) ( .
باکتری های دریایی به عنوان منبعی برای متابولیت ها
طبیعت همواره در طول هزاران سال یک منبع مهم و شگفت انگیزی از داروهای مهم و سودمند مي باشد که همواره از میکروارگانیسم ها جداسازی شده است بطوري كه تعدادی از اين داروها بعنوان داروهاي بنيادي در طب سنتی مي باشند . در قرن اخیر میکروارگانیسم ها در تولید آنتی بیوتیک ها و سایر داروها برای درمان بیماریهای مختلف نقش زیادی داشتند . از زمان کشف پنی سیلین در سال 1929 تا کشف آنزیم Tag DNA پلی مراز که از Thermus aquaticus در سال 1989 گرفته شده بود ، نزدیک به 50000 تولید طبیعی از میکروارگانیسم ها استخراج شد ، به طوری که 10000 عدد از آن به عنوان ترکیبات فعال زیستی و 100 عدد به عنوان تولیدات میکروبی گزارش شده بودند که امروزه به عنوان آنتی یوتیک و عامل ضد تومور محسوب می شوند . موفقیت بسیار زیادی در کشف داروهاي استخراج شده از میکروارگانیسم ها وجود داشت . مشکلات جداسازی متابولیت ها از باکتری های دریایی به طور عمده به واسطة غیر قابل کشت بودن قسمت عمدۀ آن ( بیش از 99% ) مي باشد . با تحقیقات مختلف دانشمندان مشخص شد که باکتری های دریایی توانایی زیادی در تولید ترکیبات فعال زیستی غیر طبیعی دارند که در هیچکدام از منابع قدیمی مشاهده نشده است . یکی از مهمترین متابولیت ها marolactin بعنوان یک مهار كننده مي باشد که در طی یک سنجش آزمایشگاهی بعنوان یک مهار كننده از ویروس تبخال ساده ( نوع 1و2 ) و همچنین بعنوان حافظ لنفوسیت T یا T سل در مقابل ویروس HIV شناخته شده است . از سوی دیگر متابولیت های جداسازي شده از Alteromonas spp بعنوان یک آنتی HIV محسوب می شود که توانایی جلوگیری از تولید آنزیم نسخه برداری را دارد به طوری که آن را از بافت Bermudion نوعی اسفنج دریایی جدا سازی کرده اند ) Jha&Rong ., 2004 ( .
متابولیت های جداسازی شده از سیانوباکتر های دریایی
سیانوباکتر ها در دریاها به طور خاصي به عنوان یکی از منابع غنی از ترکیبات زیستی فعال جدید شناخته شده اند که شامل انواع سم ها به همراه داروهای طبیعی هستند . از بین 5 شاخۀ جلبک ها تنها گروهی که دارای تولیدات طبیعی هستند متعلق به سیانوباکترها و داینافلاژله ها مي باشد . تعداد زیادی از متابولیت های جداسازی شده از سیانوباکترها متعلق به گونه های سیانوباکترهای آبهای شیرین بوده است به طوری که در مقایسه با گونه های دریایی آن راحت تر قابل کشت هستند ) Jha&Rong ., 2004 ( . از سیانوباکتر ها علاوه بر جداسازی سموم مختلف ، ویتامینهای زیادی که متعلق به گروه ویتامین B و ویتامین E هستند نیز جداسازی شده است .
همچنین از گونۀ Lyngbya lagerhaimanii و tenue Phormidium ترکیبات فعال آنتی HIV به همراه سایر ترکیبات گرفته شده است . Cyanovirin-N یک پروتئینی است که از جلبکهای سبز- آبی مختلفی استخراج شده است Boyd et al ., 1997) ( .
متابولیت های جداسازی شده از اسفنج ها
تقریباً 10000 اسفنج در دنیا شناسایی شده که بیشتر آنها در آبهای دریایی زندگی می کنند . تعدادی از متابولیتهای فعال زیستی در حدود 11 اسفنج معمولی یافت شده است . سه تا از اين اسفنج ها شامل Haliclona و Petrosia و Discodemia ، ترکیبات قوی ضد سرطانی و ضد التهابی تولید می کنند .
Batzelladine A&B که یک آلکالوئید گوانین دار چند حلقه ای است ، از نوعی اسفنج به نام Batzella spp جداسازی شده است که از باند شدن گلیکوپروتئین HIV با رسپتور خود در سطح سلول CD[SUB]4[/SUB]یک مهار قوی به عمل می آورد Jha&Rong ., 2004) ( .
متابولیت های جداسازی شده از نرمتنان
بیش از 2600 دانشمند محقق در بیش از 20 سال گذشته بررسی هایشان دلالت بر اهمیت تراکم و غلظت سموم استخراج شده از حلزونهای مخروطی ) cone snails ( در پزشکی و بیولوژی سلولی داشته است .
امروزه فقط 100 عدد از كل 50000 سم قوی ، استخراج و آنالیز شده است . همچنین از نوعی sea hare ) Bursatella leachii ( پروتئینی به نام Bursatellanin-P به عنوان یک آنتی HIV فعال نیز شناسایی شده است ) Jha&Rong ., 2004 ( .
متابولیت های جداسازی شده از خارپوستان
Saponins فعال فیزیولوژیکی به شكل گسترده ای در ستاره های دریایی و خیارهای دریایی بررسی شده است اما به عنوان دارو خیلی سودمند نیست چون بیشتر باعث لیز شدن يا تجزية سلول ها می شود .
در تحقیقی جهت تعیین بررسي اثر آنتاگونیستی نوعی رسپتور Chemokine به نام CCR5 مشخص شد که اين رسپتور می تواند به عنوان یک آنتی HIV مطرح شود ) Jha&Rong ., 2004 ( .
روش جدید برای جداسازی ترکیبات آنتی HIV (پلی ساکارید ها و پلی فنول ها) از جلبک دریایی Fucus vesiculosus
پلی ساکارید ها و پلی فنول های فعال آنتی HIV از این جلبک قهوه ای دریایی جداسازی شده است که این استخراج به وسیلۀ آب گرم به صورت خالص و از طریق همگن سازی جلبک صورت مي گيرد .
این عمل از طریق کروماتوگرافی XAD[SUB]2[/SUB] و به وسیلۀ ايجاد رسوب متوالی از رسوبات ترکیبات همراه با HOAC یخ مانند و پس از آن با ETOH انجام مي شود . رسوب که حل شد درمقابل تقطیر H[SUB]2[/SUB]O دیالیز شده و در ستونی حاوی ، C[SUB]25[/SUB] SP-Sephadex و QAE-Sephadex A[SUB]25[/SUB] ، کروماتوگرافی شد و به دنبال آن توسط ژل بر سطح Sephadex G[SUB]50[/SUB] و Sephadex G[SUB]100[/SUB] ودر نهایت به وسیلۀ HPLC بر یک ستون از shodexl on paks-804 ***** شد .
برای مقایسه و تولید آزمایشی Fucoidan ، پلی سارید جلبک سولفاته شده به وسیۀ تکنیک کروماتوگرافی ، خالص سازی شد سپس بخش جداسازی شده به وسیلۀ یخ خشک شده جدا شد و بواسطة این روش ها جهت جلوگیری از عملکرد HIV و جلوگیری از عملکرد آنزیم نسخه برداری ویروس HIV آزمایش شد Beress et al ., 1993) ( .
به دست آوردن تولیدات طبیعی دریایی
تولیدات طبیعی استفادۀ زیادی در غذا ، رنگدانه ها ، انواع رایحه (عطر) ، حشره کش ها ، در پزشکی و... دارد . بواسطة در دسترس بودن راحت گیاهان خشکی ، اين گياهان هميشه کاربرد زیادی نیز دارند . به طوری که می توانند منبع مهمی در تولیدات بسیار سودمند پزشکی به خصوص برای طب سنتی یا پزشکی بشر باشند . 25% از کل فروش دارویی ، داروهایی هستند که از تولیدات طبیعی گیاهان به دست می آیند و بعلاوه 12% هم پایه ای برای تولیدات میکروبی به عنوان تولیدات طبیعی محسوب می شوند .
محیط زیست دریا دارای یک رنج حرارتی طبیعی ( از کمتر از دمای یخ زدگی در آبهای Antarctic تا حدود C ˚ 350 در شکاف عمیق هیدروترمال ) می باشد ، همچنين دارای یک رنج فشار ( At 1000-1 ) و یک رنج نوترینتی ( در آبهای الیگو تروف تا یوتروف ) می باشد همچنين در همة این آبها یک منطقۀ نوری و غیر نوری مشاهده می شود Jha&Rong ., 2004 ) ( .
باکتری های دریایی به عنوان منبعی برای متابولیت ها
طبیعت همواره در طول هزاران سال یک منبع مهم و شگفت انگیزی از داروهای مهم و سودمند مي باشد که همواره از میکروارگانیسم ها جداسازی شده است بطوري كه تعدادی از اين داروها بعنوان داروهاي بنيادي در طب سنتی مي باشند . در قرن اخیر میکروارگانیسم ها در تولید آنتی بیوتیک ها و سایر داروها برای درمان بیماریهای مختلف نقش زیادی داشتند . از زمان کشف پنی سیلین در سال 1929 تا کشف آنزیم Tag DNA پلی مراز که از Thermus aquaticus در سال 1989 گرفته شده بود ، نزدیک به 50000 تولید طبیعی از میکروارگانیسم ها استخراج شد ، به طوری که 10000 عدد از آن به عنوان ترکیبات فعال زیستی و 100 عدد به عنوان تولیدات میکروبی گزارش شده بودند که امروزه به عنوان آنتی یوتیک و عامل ضد تومور محسوب می شوند . موفقیت بسیار زیادی در کشف داروهاي استخراج شده از میکروارگانیسم ها وجود داشت . مشکلات جداسازی متابولیت ها از باکتری های دریایی به طور عمده به واسطة غیر قابل کشت بودن قسمت عمدۀ آن ( بیش از 99% ) مي باشد . با تحقیقات مختلف دانشمندان مشخص شد که باکتری های دریایی توانایی زیادی در تولید ترکیبات فعال زیستی غیر طبیعی دارند که در هیچکدام از منابع قدیمی مشاهده نشده است . یکی از مهمترین متابولیت ها marolactin بعنوان یک مهار كننده مي باشد که در طی یک سنجش آزمایشگاهی بعنوان یک مهار كننده از ویروس تبخال ساده ( نوع 1و2 ) و همچنین بعنوان حافظ لنفوسیت T یا T سل در مقابل ویروس HIV شناخته شده است . از سوی دیگر متابولیت های جداسازي شده از Alteromonas spp بعنوان یک آنتی HIV محسوب می شود که توانایی جلوگیری از تولید آنزیم نسخه برداری را دارد به طوری که آن را از بافت Bermudion نوعی اسفنج دریایی جدا سازی کرده اند ) Jha&Rong ., 2004 ( .
متابولیت های جداسازی شده از سیانوباکتر های دریایی
سیانوباکتر ها در دریاها به طور خاصي به عنوان یکی از منابع غنی از ترکیبات زیستی فعال جدید شناخته شده اند که شامل انواع سم ها به همراه داروهای طبیعی هستند . از بین 5 شاخۀ جلبک ها تنها گروهی که دارای تولیدات طبیعی هستند متعلق به سیانوباکترها و داینافلاژله ها مي باشد . تعداد زیادی از متابولیت های جداسازی شده از سیانوباکترها متعلق به گونه های سیانوباکترهای آبهای شیرین بوده است به طوری که در مقایسه با گونه های دریایی آن راحت تر قابل کشت هستند ) Jha&Rong ., 2004 ( . از سیانوباکتر ها علاوه بر جداسازی سموم مختلف ، ویتامینهای زیادی که متعلق به گروه ویتامین B و ویتامین E هستند نیز جداسازی شده است .
همچنین از گونۀ Lyngbya lagerhaimanii و tenue Phormidium ترکیبات فعال آنتی HIV به همراه سایر ترکیبات گرفته شده است . Cyanovirin-N یک پروتئینی است که از جلبکهای سبز- آبی مختلفی استخراج شده است Boyd et al ., 1997) ( .
متابولیت های جداسازی شده از اسفنج ها
تقریباً 10000 اسفنج در دنیا شناسایی شده که بیشتر آنها در آبهای دریایی زندگی می کنند . تعدادی از متابولیتهای فعال زیستی در حدود 11 اسفنج معمولی یافت شده است . سه تا از اين اسفنج ها شامل Haliclona و Petrosia و Discodemia ، ترکیبات قوی ضد سرطانی و ضد التهابی تولید می کنند .
Batzelladine A&B که یک آلکالوئید گوانین دار چند حلقه ای است ، از نوعی اسفنج به نام Batzella spp جداسازی شده است که از باند شدن گلیکوپروتئین HIV با رسپتور خود در سطح سلول CD[SUB]4[/SUB]یک مهار قوی به عمل می آورد Jha&Rong ., 2004) ( .
متابولیت های جداسازی شده از نرمتنان
بیش از 2600 دانشمند محقق در بیش از 20 سال گذشته بررسی هایشان دلالت بر اهمیت تراکم و غلظت سموم استخراج شده از حلزونهای مخروطی ) cone snails ( در پزشکی و بیولوژی سلولی داشته است .
امروزه فقط 100 عدد از كل 50000 سم قوی ، استخراج و آنالیز شده است . همچنین از نوعی sea hare ) Bursatella leachii ( پروتئینی به نام Bursatellanin-P به عنوان یک آنتی HIV فعال نیز شناسایی شده است ) Jha&Rong ., 2004 ( .
متابولیت های جداسازی شده از خارپوستان
Saponins فعال فیزیولوژیکی به شكل گسترده ای در ستاره های دریایی و خیارهای دریایی بررسی شده است اما به عنوان دارو خیلی سودمند نیست چون بیشتر باعث لیز شدن يا تجزية سلول ها می شود .
در تحقیقی جهت تعیین بررسي اثر آنتاگونیستی نوعی رسپتور Chemokine به نام CCR5 مشخص شد که اين رسپتور می تواند به عنوان یک آنتی HIV مطرح شود ) Jha&Rong ., 2004 ( .
روش جدید برای جداسازی ترکیبات آنتی HIV (پلی ساکارید ها و پلی فنول ها) از جلبک دریایی Fucus vesiculosus
پلی ساکارید ها و پلی فنول های فعال آنتی HIV از این جلبک قهوه ای دریایی جداسازی شده است که این استخراج به وسیلۀ آب گرم به صورت خالص و از طریق همگن سازی جلبک صورت مي گيرد .
این عمل از طریق کروماتوگرافی XAD[SUB]2[/SUB] و به وسیلۀ ايجاد رسوب متوالی از رسوبات ترکیبات همراه با HOAC یخ مانند و پس از آن با ETOH انجام مي شود . رسوب که حل شد درمقابل تقطیر H[SUB]2[/SUB]O دیالیز شده و در ستونی حاوی ، C[SUB]25[/SUB] SP-Sephadex و QAE-Sephadex A[SUB]25[/SUB] ، کروماتوگرافی شد و به دنبال آن توسط ژل بر سطح Sephadex G[SUB]50[/SUB] و Sephadex G[SUB]100[/SUB] ودر نهایت به وسیلۀ HPLC بر یک ستون از shodexl on paks-804 ***** شد .
برای مقایسه و تولید آزمایشی Fucoidan ، پلی سارید جلبک سولفاته شده به وسیۀ تکنیک کروماتوگرافی ، خالص سازی شد سپس بخش جداسازی شده به وسیلۀ یخ خشک شده جدا شد و بواسطة این روش ها جهت جلوگیری از عملکرد HIV و جلوگیری از عملکرد آنزیم نسخه برداری ویروس HIV آزمایش شد Beress et al ., 1993) ( .
تولیدات طبیعی فعال آنتی HIV از ارگانیسم های دریایی
اقیانوس ها منبع بکری از ترکیبات فعال زیستی جدیدی هستند که می توانند قابل کشت باشند .
برای پیکار با ویروس HIV مي بایست سیاست های گوناگونی را در رابطه با آنالیز ترکیبات پیچیده که برای درمان آن مؤثر باشد پیش گرفت .
تولیدات طبیعی که از گونه های مختلف به دست می آید به صورت متابولیت هایی تحت نام ترکیبات ضد ویروسی فعال هستند که در مقابل HIV توليد شده اند .
در محیط زیست دریا تقریباً فقط نیمی از ترکیبات زیستی گوناگون شناسایی شده است که این خود منبعی عظیم برای ترکیبات جدید می باشد .
به طوری که بیش از 150 تولید طبیعی در سطح امیدوار کننده به شكل فعال ، آنتی HIV محسوب می شوند که توسط سنجشهای آزمایشگاهی ، ترکیبات را از ارگانیسم های دریایی استخراج می کنند .
برخی از متابولیتهای دریایی که نشانه ای از خاصیت فعال آنتی HIV دارند در سنجش های مختلف بیوشیمیایی برای درمان استفاده می شود ) Roch&Bernard ., 2004 ( .
جلبک ها برای درمان HIV ، سبز- آبی یا قرمز ؟
جلبک ها از ارگانیسم های اولیه هستند که دارای کلروفیل بوده و قادر به فتوسنتز هستند ولی ریشه ، ساقه و برگ واقعی ندارند .
جلبک های سبز [SUB]– [/SUB][SUB][/SUB] آبی از جلبک های اولیه هستند به نام سیانوباکتر ها که قادر به جلوگیری از بیماری ها هستند .
بعضي از مصرف كننده هاي اين جلبك ها معتقدند که جلبک ها باعث قوی شدن سیستم ایمنی بدن می شود .
رنگ جلبک ها مرتبط با طیف نوری دريافتي مي باشد كه توسط جلبک ها جذب می شوند . جلبک های سبز - آبی و جلبک های سبز بیشتر خاص آبهای شیرین هستند . جلبک های قرمز دریایی اغلب دارای ارزش غذایی هستند و به عنوان یک منبع مهم برای نوترینت ها و در علم گیاه پزشکی داراي اهميت مي باشند .
برخي بر این باورند که جلبک های ماکروسکوپی در کاهش چربی و کلسترول خون مؤثر هستند همچنین این جلبک ها ارزش غذایی زیادی دارند و آگار نیز ترکیبی است که از جلبک های قرمز به دست می آید .
جلبک ها نیز می توانند منبع مهمی برای ترکیباتی باشند که شامل ترکیبات فعال آنتی HIV بوده بطوري از جلبک های سبز- آبی استخراج شده اند .
سه محقق به نامهای Robinson و Montefioriو Mitchell از یک نوع جلبک قرمز دریایی به نام Ptilota plumosa ترکیبی که قدرت آلودگی HIV را کاهش می دهد استخراج كردند ) Meyer . 1996 ( .
یک B-galactose-lectin اختصاصی جدا سازی شده از کرم دریایی Chaetopterus variopedatus با خاصيت آنتي HIV
FAD تا به این هنگام وجود تعدادی مهار كنندة نسخه برداری ، مهار كنندة پروتئاز و مهار كنندة پیوند گلیکوپروتئین HIV با رسپتور آن در سطح سلول هدف را تأیید کرده است . درمان عليه رتروویروس ها شامل ترکیبی از داروهای شیمیایی است که منجر به بهبود و افزایش مدت حیات در بیماران مبتلا به ایدز می شود . پیشرفت در داروهای جدید آنتی HIV همچنان ادامه دارد . تولیدات طبیعی به شكل مستمر منجر به موفقیت در کشف منابع دارویی می شود . از جانوران ، گیاهان ، halobios و میکروارگانیسم ها بیش از هزاران ترکیب طبیعی فعال آنتی HIV-1 جداسازی و شناسایی شده است . این ترکیبات شامل استرولهای سولفاته ، ترپن ها ، آلکالوئیدها ، پلی ساکارید ها ، پلی فنول ها ، پپتید ها و ... هستند .
lectin با مونو الیگوساکارید ها و گلیکوپروتئین ها به طور برگشت پذیر و اختصاصی باند می شود . هر مولکول lectin به طور اختصاصی از دو یا چند بخش کربوهیدرات تشکیل شده است که به طور معمول دو یا چند حلقه ای هستند . هنگامی که lectin با پوشش پروتئینی ویروس HIV اتصال برقرار می کند ، منجر به باند شدن آن با gp120 می شود ، سپس رسوب یا آگلوتیناسیون آن رخ می دهد . در سالهای اخیر مشخص شده که ارگانیسم های دریایی جهت شناسایی منابع جدید lectin خیلی جالب مي باشند . تعدادی از این lectin ها به طور خاصی از بی مهرگان دریایی خالص سازی شده است .
کرم دریایی به نام Chaetopterus variopedatus جداسازی شده است .
در این تحقیق ترکیب فعال آنتیHIV-1 طی سنجش آزمایشگاهی از CVL جدا شد . بنلبراين نتایج نشان دادند که CVL از بیماری زایی ویروس و پاسخ ویروس HIV-1 در سلول میزبان به وسیلۀ یک مکانیسم بلوکر کنندگی جلوگيري مي كند .
در مواد و روشهای این تحقیق مشخص شد که CVL از نوعی کرم دریایی به نام Chaetopterus variopedatus که متعلق به شاخۀ Annelida ، ردۀ Polychaeta و خانوادۀ Chaetopteridae است از ناحیۀ ساب لیتورال خور Peter Great واقع در دریای ژاپن جمع آوری شده است . نمونه های این کرم دریایی در محلول 0/01 M PBS هموژنیزه شدند و این مخلوط گرفته شده و سانتریفیوژ شد سپس پودر SO[SUB]4[/SUB] [SUB]2[/SUB][SUB][/SUB] NH[SUB]4[/SUB]) ( به ترکیب Super natant 70% اشباع اضافه شد .
ترکیب اصلی گرفته شده به وسیلۀ سانتریفیوژ در g [SUB]×[/SUB][SUB][/SUB]13000 جمع آوری شده ، در محلول
M 01/0 PBS حل شده و سپس دیالیز می شود .
ترکیب دیالیز شده از یک ستون ( cm10[SUB]×[/SUB][SUB][/SUB]1 ) حاوی SP-Sephadex G-50 عبور داده می شوند و به وسیلۀ کروماتوگرافی در یک ستون ( cm27[SUB]×[/SUB][SUB][/SUB]5/1 ) حاوی ترکیب lactosyl-sepharos 4B و ستون ( cm50[SUB]×[/SUB][SUB][/SUB]5/1 ) ژن - *****اسیون حاوی Sephadex75 خالص سازی می شوند .
یک پیک متقارن از hemagglutinating فعال به همراه محتویات پروتئینی مشاهده شد .
نهایتاً در روی SDS-PAGE ، lectin به صورت یک تک باند با وزنkDa 30 مشخص شد ) Wang et al ., 2006 ( .
جداسازی و توصیف آنتیHIV جدید از گیاهان ، دریا و ارگانیسمهای میکروبی
یک ترکیب سیتوتوکسیک جدید به نام Isomalabaricane triterpenes از نوعی اسفنج به نام Stelletta sp و دو ترکیب آنتی HIV به نام Pterocarpans و Isoflavanoids نیز از نوعی گیاه ناحیۀ حاره در جنس Erythrina جدا سازی شد.همچنین دو ترکیب آنتی HIV دیگر به نامهای enniatins و cyclohexadepsipeptid از قارچهایی از جنسهای Fusarium وAlternariکشف شدند بطوريكه ترکیب enniatins در این قارچهاي مذكور به عنوان یک ترکیب فعال آنتی HIV در رشته یا فیبر توخالی این قارچ طی سنجش آزمایشگاهی به دست آمد.در تحقیق حاضر ساختارترکیبات متابولیتی استخراج شده بعنوان یک ترکیب آنتی HIV و ضد سرطان یا به عنوان یک آنتی تومور مي باشند.ارگانیسمهایي مثل گیاهان ،بی مهرگان دریایی، قارچها، جلبکهای میکروسکوپیوماکروسکوپی،سیانوباکترهاوسایر میکروب ها دارای خواص HIV مي باشند) Mckee et al ., 1997 ( .
استخراج ترکیب Isomalabaricans Triterpens از گونۀ Stelletta spp
گروههای مختلفی جداسازی این ترکیب را از اسفنج ها در جنس های Jaspis و Stelletta گزارش کردند . در این تحقیق جداسازی 4 ترکیب جدید از این خانواده نیز به نامهای : F و E و D و C Stellettins همراه با ترکیبات شناخته شدۀ دیگر به نامهای : Isomalabaricans Triterpens وG و B و A Stellettins گزارش شدند . این ترکیبات از گونۀ Stelletta sp و خانوادۀ Stellettidae جداسازی شده و جمع آوری نمونه ها برای درمان بیماری سرطان از بخش ساحلی شمال استرالیا و نزدیک بخش جلویی Wilber force در بخش 15 m انجام شد ) Mckee et al .,1997 ( .